有了這個突破之后,后面的工作順暢了很多。
他用同樣的方法繼續(xù)進行溶瘤病毒的定向培養(yǎng),每一批次的元力催生都讓病毒的性能往上提升一截。
經(jīng)過將近兩個月的反復(fù)優(yōu)化,他得到了一株性能極其優(yōu)異的溶瘤病毒株,感染效率高、特異性強、裂解能力出眾,在體外實驗中能把靶向的癌細胞在四十八小時內(nèi)全部裂解干凈。
接下來是基因編輯工具的搭載。
cRISpR-cas9是目前最成熟的基因編輯系統(tǒng)之一。
李斌設(shè)計了一套靶向tERt基因的sgRNA,配合高保真的cas9蛋白,組裝成完整的基因編輯載體。
他把這套編輯系統(tǒng)通過慢病毒載體搭載到之前優(yōu)化的溶瘤病毒上,形成了一個復(fù)合結(jié)構(gòu),外殼是溶瘤病毒,內(nèi)部攜帶了基因編輯工具。
搭載過程比預(yù)想的順利。
可能跟元力催生過溶瘤病毒的某種適應(yīng)性有關(guān)。
那些經(jīng)過元力浸潤的病毒對外源基因片段的裝載效率非常高,幾乎不需要額外的篩選就能獲得高表達量。
李斌用了一周多的時間完成了載體構(gòu)建和驗證,通過測序確認(rèn)編輯系統(tǒng)正確整合到了病毒基因組中。
五月中旬,完整的復(fù)合型溶瘤病毒誕生了。
李斌給它編號LV-GE-01,溶瘤病毒-基因編輯-第一代。
但他心里清楚,真正讓LV-GE-01與眾不同的那個因素,永遠不會出現(xiàn)在任何論文里。
接下來是驗證實驗。
他用了六種不同來源的癌細胞系做體外測試,肺癌、肝癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、黑色素瘤。
每種癌細胞系都設(shè)置了對照組和實驗組,對照組不加病毒,實驗組以不同的感染復(fù)數(shù)加入LV-GE-01。
然后他跟蹤了細胞的增殖曲線、端粒長度變化、tERt基因的表達水平、細胞凋亡率等多個指標(biāo)。
結(jié)果幾乎是教科書級別的完美。
實驗組的癌細胞在感染LV-GE-01之后,先是出現(xiàn)明顯的增殖停滯,然后開始大量凋亡。
端粒長度檢測顯示,那些存活下來的少數(shù)細胞也出現(xiàn)了端粒的顯著縮短,而且隨著分裂代數(shù)的增加端粒繼續(xù)縮短,最后全部進入衰老狀態(tài)。
tERt基因的表達水平檢測證實了基因編輯的成功,編輯效率超過百分之九十九,殘余的tERt表達也被大幅抑制。
六種癌細胞系,無一例外。
李斌又做了更進一步的驗證。
他把經(jīng)過LV-GE-01處理后的癌細胞繼續(xù)傳代培養(yǎng),觀察它們是否會出現(xiàn)耐藥性或者。
結(jié)果連續(xù)傳了二十代,那些存活下來的癌細胞始終保持著端粒縮短的狀態(tài),沒有出現(xiàn)新的端粒酶激活機制。
這意味著一件事,tERt基因的敲除是永久性的,癌細胞失去了重新激活端粒酶的能力。
復(fù)發(fā)的基礎(chǔ)被徹底鏟除了。
六月初,李斌完成了最后一組驗證實驗,把所有的實驗數(shù)據(jù)和圖譜整理歸檔。
他坐在實驗室的電腦前面,把幾百個數(shù)據(jù)文件按照時間順序排列好,把關(guān)鍵結(jié)果的圖表重新繪制了一遍,把實驗記錄本上的手寫筆記掃描成電子版。
一份完整的、可供他人審閱的實驗資料逐漸成型了。
但這里面的核心環(huán)節(jié)缺失了。
他翻到溶瘤病毒定向培養(yǎng)的部分,筆記本上寫的是一套常規(guī)的培養(yǎng)方案,溫度、時間、培養(yǎng)基成分、傳代頻率,所有參數(shù)都清清楚楚。
任何一個受過訓(xùn)練的研究人員按照這個方案去做,都能得到一株溶瘤病毒。
但那株病毒的性能跟LV-GE-01差了十萬八千里。
中間缺少的那一步,寫在空氣里。
李斌想到了一件事,他要給LV-GE-01加上了基因鎖。
基因鎖的原理并不復(fù)雜。
他在溶瘤病毒的基因組中嵌入了一段自我抑制序列,這段序列在正常情況下處于沉默狀態(tài),不影響病毒的功能表達。
但一旦有人試圖對病毒進行擴增培養(yǎng)或者基因操作,特定的觸發(fā)條件會讓這段序列激活,啟動病毒的自我降解程序。
換句話說,別人就算拿到了LV-GE-01的樣本,也沒辦法通過常規(guī)方法培養(yǎng)出更多的病毒。
病毒的繁殖能力被鎖住了,除了李斌本人,沒人能解開這把鎖。
解鎖的方式跟元力有關(guān)。
只有經(jīng)過李斌元力浸潤過的特殊培養(yǎng)基才能維持LV-GE-01的擴增能力,沒有那一縷元力的參與,病毒在傳代過程中就會逐漸喪失活性,兩到三代之后徹底失活。
他不是想把這種技術(shù)鎖在象牙塔里,他最終的目的正是讓它造福所有人。
但在那之前,他需要確保這份成果不會被某些人竊取、壟斷、變成收割病人的工具。
他的規(guī)劃很清楚:在合適的時候回到家鄉(xiāng)建公司,把LV-GE-01的技術(shù)產(chǎn)業(yè)化,讓家鄉(xiāng)借此騰飛。
在那之前,它需要一個保護罩。
加了基因鎖后,李斌坐在椅子上,長長地吐出一口氣。
他低頭看了看自己的雙手,元力在掌心里緩緩流動。
溶瘤病毒的定向培養(yǎng)只是一個開始,往后他還會用它做更多的事情,改變更多的局面。
他把電腦關(guān)了,李斌站起來,把白大褂脫下來掛在門后的掛鉤上,拿起桌上的鑰匙和手機,關(guān)了燈,推門走出去。
走廊里漆黑一片,走到一樓大廳的時候,門衛(wèi)跟他打了個招呼:李同學(xué),又是你啊,天天弄到這么晚。
快了,實驗快做完了。李斌笑著回了一句,推門走出了學(xué)院樓。
李斌沿著那條種滿梧桐的路往宿舍區(qū)走,腦子里一刻也沒有停下來。
他已經(jīng)把LV-GE-01封存在了-80度冰箱的一個專屬隔層里,加了生物安全鎖和密碼,除了他之外沒有人能取到。
那支小小的凍存管,裝著的東西足以改變千萬人的命運。
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